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293細胞(cellline)是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。是人腎上皮細胞系,有多種衍生株,比如HEK293,293T/17等,來源都是人胚胎腎細胞,其極少表達細胞外配體所需的內(nèi)生受體,且比較容易轉(zhuǎn)染。
293T細胞的凍存:
1. 隨著傳代的次數(shù)增加,293T細胞會出現(xiàn)生長狀態(tài)下降,出現(xiàn)突變等。所以要在細胞購進時就進行大量凍存,以保證實驗的穩(wěn)定性和持續(xù)性。
2. 在細胞對數(shù)生長期進行凍存,增加細胞復(fù)蘇成活率。
3. 倒去細胞上清液,加入D-Hank's液洗去殘留的培養(yǎng)基。
4. 加入0.25%的胰酶,消化10-20s后倒去。
5. 鏡下觀察細胞變圓,細胞間間隙加大時,加入新鮮培養(yǎng)基吹打混勻。
6. 細胞計數(shù)。
7. 將細胞離心,1000rpm,2min。
8.根據(jù)計數(shù)結(jié)果加入細胞凍存液(70%完全培養(yǎng)基+ 20% FBS + 10% DMSO)重懸細胞,密度為3×106個/ml。
9. 分裝進細胞凍存管,放入泡沫盒中,放入-80℃低溫冰箱。
10. 第二天將細胞放入液氮灌,并記錄。
11. 復(fù)蘇檢測細胞存活率,細胞狀態(tài)等,并記錄。
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