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293T細胞的凍存

來源: 上海撫生實業(yè)有限公司 >> 進入該公司展臺 2021/12/21 11:25:47 已瀏覽:
導(dǎo)讀:293T細胞的凍存

293細胞(cellline)是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。是人腎上皮細胞系,有多種衍生株,比如HEK293,293T/17等,來源都是人胚胎腎細胞,其極少表達細胞外配體所需的內(nèi)生受體,且比較容易轉(zhuǎn)染。

293T細胞的凍存:


1. 隨著傳代的次數(shù)增加,293T細胞會出現(xiàn)生長狀態(tài)下降,出現(xiàn)突變等。所以要在細胞購進時就進行大量凍存,以保證實驗的穩(wěn)定性和持續(xù)性。


2. 在細胞對數(shù)生長期進行凍存,增加細胞復(fù)蘇成活率。


3. 倒去細胞上清液,加入D-Hank's液洗去殘留的培養(yǎng)基。


4. 加入0.25%的胰酶,消化10-20s后倒去。


5. 鏡下觀察細胞變圓,細胞間間隙加大時,加入新鮮培養(yǎng)基吹打混勻。


6. 細胞計數(shù)。


7. 將細胞離心,1000rpm,2min。


8.根據(jù)計數(shù)結(jié)果加入細胞凍存液(70%完全培養(yǎng)基+ 20% FBS + 10% DMSO)重懸細胞,密度為3×106個/ml。


9. 分裝進細胞凍存管,放入泡沫盒中,放入-80℃低溫冰箱。


10. 第二天將細胞放入液氮灌,并記錄。


11. 復(fù)蘇檢測細胞存活率,細胞狀態(tài)等,并記錄。



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